WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 |   ...   | 100 | 101 || 103 | 104 |   ...   | 140 |

Иммуноблотинг для определения антител к белкам Helicobacter pylori в сыворотке Исследования последних лет показали, что развитие гастрита и язвы желудка связано в первую очередь с колонизацией слизистой оболочки токсигенными штаммами Helicobacter pylori, в то время как колонизация нетоксигенными штаммами только в небольшом процен­те случаев приводит к развитию этих заболеваний. Токсигенность штаммов обусловлена про­дукцией вакуолярного цитотоксина, синтез которого связан с продукцией белка с мол. мас­сой 000—128 000, кодируемого геном Coag A (cytoxinassociated gene А), а также токси­нов, кодируемых геном Vac А. Простое определение антител в сыворотке крови пациента свидетельствует о наличии инфекции Helicobacter pylori, но не дает информации о том, вы­звана ли она наличием токсигенных штаммов бактерий.

При получении положительного ре­зультата для подтверждения наличия токсигенных штаммов бактерий используется метод иммуноблотинга Westernblot — встречная преципитация в геле антител в сыворотке крови больного с различными белками Helicobacter pylori, подвергнутыми разделению по молеку­лярной массе с помощью электрофореза и нанесенными на нитроцеллюлозу. Иммунобло­тинг позволяет выявить наличие антител в крови пациента к токсигенным белкам Helicobac­ter pylori, таким, как геномы Coag А и Vac А, уреазным субъединицам, а также белкам с мо­лекулярной массой 19 500; 26 500; 30 000; 36 000; 89 000, которые специфичны для этой ин­фекции. Данный метод позволяет исключить неспецифическое увеличении уровня антител при простом серологическом исследовании.

Хламидийная инфекция Хламидии представляют большую группу облигатных внутриклеточных паразитов, очень близких к грамотрицательным бактериям. Их можно рассматривать как грамотрицательные бактерии, которые утратили способность синтезировать АТФ, ГТФ и ряд других ферментных систем, иными словами утратили способность выработки метаболической энергии.

Этот де­фект обусловливает их внутриклеточный рост, благодаря которому они имеют доступ к бога­тым энергией промежуточным продуктам метаболизма клеток хозяина. Род Chlamidia делят на 4 вида: Chlamidia trachomatis, Chlamidia psittaci, Chlamidia pneumonia, Chlamidia percorum. Все хламидии сходны по морфологическим признакам, имеют общий групповой антиген и раз­множаются в цитоплазме организмахозяина, проходя определенные стадии развития.

Инфек­ционным началом является так называемое элементарное тельце — маленькая клетка диамет­ром около 0,3 мкм. Эта частица проникает в клетку хозяина при фагоцитозе. Из поверхност­ных мембран клетки хозяина вокруг этой маленькой частицы образуется вакуоль. Элементар­ное тельце делится, превращаясь в «ретикулярное тельце» диаметром около 0,5—1,0 мкм. Внутри образованной вакуоли крупная частица увеличивается в размерах и многократно де­лится путем образования поперечной перегородки. В конечном счете вся вакуоль заполняется элементарными частицами (из одного элементарного тельца получается от 200 до 1000 инфек­ционных единиц) и превращается во «включение» в цитоплазме клеткихозяина. Новообразо­ванные элементарные тельца выходят из клетки, которая в конечном счете разрывается, и могут инфицировать новые клетки. Весь цикл развития занимает 48—72 ч.

Заболевания, вызываемые Chlamidia trachomatis Трахома. Хронический кератоконъюнктивит, который начинается с острых воспали­тельных изменений коньюнктивы и роговицы, приводит к образованию рубцов и слепоте.

В соскобах с конъюнктивы методом флюоресценции определяют хламидийные антиге­ны в эпителиальных клетках. Чаще их обнаруживают на ранних стадиях заболевания в верх­ней части конъюнктивы.

Урогенитальный хламидиоз и конъюнктивит. Частота обнаружения хламидии у мужчин с негонококковым уретритом составляет 30—50 %. Инфицированность женщин, имеющих первую беременность, достигает 5—20 %, делающих аборт — 3—18 %. Среди больных, имею­щих признаки цервицита, хламидийную инфекцию выявляют в 20—40 % случаев;

сальпин­гит — в 20—70 % случаев; инфекцию мочевых путей — в 5—10 % случаев. У больных со сме­шанной урогенитальной инфекцией хламидиоз в сочетании с гонореей наблюдается в 23,5 % случаев, с трихомониазом — в 39,5 %, с гонореей и трихомониазом — в 36,8 % [Делекторский В.В. и др., 1996]. В последние годы инфекция нередко ассоциирована с микоплазменной и уреаплазменной инфекцией, гарднереллезом. По данным различных авторов, 6—7 % детей уже при рождении оказываются инфицированными хламидиями.



Иммунологические типы Chlamidia trachomatis DK — возбудители заболеваний, пере­даваемых половым путем, при которых могут развиваться и инфекционные поражения глаз (конъюнктивиты). У мужчин Chlamidia trachomatis являются возбудителями негонококковых уретритов, эпидидимитов, простатитов, проктитов, болезни Рейтера. У женщин Chlamidia trachomatis вызывают цервициты, сальпингиты, воспалительные заболевания органов малого таза, перигепатит, уретрит. В результате у мужчин и женщин может развиваться бесплодие. Считается, что около 80 % трубного бесплодия вызвано хламидиями. При любой локализа­ции инфекции может развиваться соответствующая симптоматика заболевания. В то же время болезнь может протекать бессимптомно (примерно в 50 % случаев у женщин), но передаваться половым путем партнерам [Козлова В.И., Пухнер А.Ф., 1995].

Поражения дыхательных путей, вызываемых Chlamidia. У взрослых, больных хламидийным конъюнктивитом, нередко появляются симптомы поражения верхних дыхательных путей (фарингит, ринит, отит и др.), которые развиваются, повидимому, в результате рас­пространения хламидийной инфекции через слезноносовой канал. Пневмония у взрослых обычно не наблюдается. У новорожденных, заразившихся от матерей, через 2—12 нед после родов возможны поражения респираторной системы вплоть до пневмонии.

Венерическая лимфогранулема. Эта форма хламидиоза распространена в тропических и умеренных зонах. Для нее характерно развитие гнойного пахового лимфаденита.

Возбудите­лями являются Chlamidia trachomatis иммунологических типов L1L3.

Синдром Рейтера. Для синдрома Рейтера характерна классическая триада: уретрит, конъюнктивит и артрит. При данном синдроме хламидии могут быть обнаружены в синови­альной жидкости. Наблюдается возрастание титра антител классов IgA, IgM, IgG в ходе раз­вития активной инфекции суставов.

Эндокардиты. Клинически протекают молниеносно со значительным поражением кла­панов аорты.

Первым и самым ответственным этапом при диагностике инфекционного процесса, яв­ляется забор материала у пациента.

1. Методика забора материала из уретры у мужчин:

пациент не должен мочиться 1 ч до забора материала;

ввести маленький капроновый тампон в уретру на 2—4 см, повернуть тампон на 360° и вынуть его;

сразу же после забора материала поместить тампон на предметное стекло и, вращая тампон вдоль предметного стекла, равномерно распределить материал по его по­ верхности;

высушить мазок на воздухе и доставить в лабораторию.

2. Методика забора материала из цервикального канала с использованием цитощеточки:

удалить ватой или тампоном слизь;

ввести щеточку в цервикальный канал и повернуть ее на 360° вынуть, не касаясь по­ верхности влагалища;

поместить щеточку на предметное стекло и, вращая тампон вдоль предметного стекла, равномерно распределить материал по его поверхности;

высушить мазок на воздухе и доставить в лабораторию.

3. Методика приготовления мазков с конъюнктивы:

нанести местный анестетик на один или оба глаза;

используя малый тампон, осторожно протереть им внутреннюю поверхность ниж­ него, а затем верхнего века, при заборе материала с обоих глаз вначале протирают менее пораженный глаз;

сразу же после забора материала поместить тампон на предметное стекло и, вращая тампон вдоль предметного стекла, равномерно распределить материал по его по­ верхности;

высушить мазок на воздухе и доставить в лабораторию.

Антитела IgA, IgM, IgG к Chlamidia trachomatis в сыворотке Диагностический титр антител к Chlamidia trachomatis в крови: для IgM — 1:8 и выше, для IgG — 1:64 и выше.

Во время острой хламидийной инфекции и вскоре после нее наблюдается повышение титра антител IgA, IgM и IgG к Chlamidia trachomatis в крови. Инфицированный Chlamidia trachomatis организм продуцирует антитела, которые имеют слабое защитное действие: обычно возбудители персистируют даже при наличии высоких титров антител. Раннее интенсивное лечение может угнетать синтез антител.





Вследствие относительно большой «антигенной массы» хламидий при инфекциях половых органов сывороточные антитела IgG обнаруживают довольно часто и в высоких титрах. Так, у детей с хламидийной пневмонией они могут быть очень высокими — 1:2000—1:4000. Антитела класса IgM выявляют в острый период инфекции, наличие антител IgM свидетельствует об активности хламидиоза. Немного позже появляются антитела класса IgG. Выявление антител класса IgA свидетельствует о выраженном аутоаллергическом процессе у больного и наиболее часто определяется у больных с синдромом Рейтера. Наличие антител класса IgA говорит о тяжелом течении заболевания у пациента. Определение уровня антител к хламидиям в крови необходимо проводить в динамике, оценка результатов исследований, основанная на однократном исследовании, ненадежна.

Новорожденных и их матерей обследуют в 1—3й сутки после родов и в случае отрица­тельного результата при наличии клинической картины заболевания — повторно на 5—7е и 10—14е сутки. Отсутствие у новорожденных антихлам ид ийных антител не означает отсутст­вие хламидийной инфекции.

Определение антител к Chlamidia trachomatis в крови является вспомогательным тестом диагностики хламидиоза, так как изза низкой иммуногенности у 50 % больных хламидиозом антитела не обнаруживают.

Определение антител IgA, IgM, IgG к Chlamidia trachomatis в крови необходимо для диа­гностики хламидиозной инфекции при:

уретритах, простатитах, цервицитах, аднекситах;

пневмонии, воспалительных заболеваниях легких;

болезни Рейтера, синдроме Бехчета, инфекционных артропатиях.

Экспрессдиагностика урогенитального хламидиоза Chlamidia trachomatis в материале из мочеполовых органов в норме отсутствуют.

Метод основан на выявлении антигенов Chlamidia trachomatis в соскобах из уретры, цервикального канала и конъюнктивы методом иммуноферментного анализа с визуальной оценкой результата. Данный метод основан на наличии у хламидий родоспецифического липополисахаридного антигена. Этот метод позволяет проводить быстрый скрининг возбудите­ля, однако окончательный диагноз устанавливают при помощи метода флюоресцирующих антител или ПЦР. Результаты исследования выражают в виде положительного или отрица­тельного ответа. Чтобы получить удовлетворительные результаты исследования, необходимо соблюдать определенные правила: материал (соскоб) должен быть правильно взят и своевре­менно доставлен в лабораторию (в течение 2 ч).

Экспрессдиагностика урогенитального хламидиоза необходима для диагностики хламидиозной инфекции при:

уретритах, простатитах, цервицитах, аднекситах.

Определение Chlamidia trachomatis в материале методом прямой иммунофлюоресценции Chlamidia trachomatis в материале из мочеполовых органов в норме отсутствуют.

Принцип метода заключается в использовании моноклональных антител, меченных флюоресцирующим изотиоцианатом против главного белка внешней мембраны хламидий, имеющегося во всех сероварах Chlamidia trachomatis, а также у элементарных и ретикуляр­ных телец. Чувствительность данного метода достигает 95 %, а применение моноклональных антител обусловливает высокую специфичность.

Количественное определение антигена Chlamidia trachomatis в материале иммуноферментным методом Антиген Chlamidia trachomatis в материале из мочеполовых органов в норме отсутствует.

Данный метод дополняет спектр других методов диагностики хламидиоза и позволяет диагностировать до 15 серотипов хламидий. Метод ИФА позволяет количественно опреде­лить антиген хламидий в эндоцервикальном, уретральном отделяемом, а также в моче, в глазном отделяемом больных с целью диагностики заболевания.

Специфичность данного ме­тода составляет 97 %, чувствительность — 92 %, сравнима с методом полимеразной цепной реакции (99,8 и 94,6 % соответственно).

Вместе с тем этот метод менее трудоемок. Он осно­ван на прямом определении образовавшегося иммунокомплекса антитело—липосахаридный антиген хламидий. В качестве антител используют кроличьи антихламидийные антитела.

Микоплазменная инфекция В настоящее время описано несколько штаммов микоплазм. Микоплазмы — группа весьма разнообразных и характерных по морфологии бактерий размером 150—200 нм.

Pages:     | 1 |   ...   | 100 | 101 || 103 | 104 |   ...   | 140 |










© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.